PLATEFORMES DE VACCIN INTÉGRÉES

TESTS DE NEUTRALISATION PAR RÉDUCTION DES PLAGES DE LYSE (PRNT) ET MICROPRNT

Les anticorps neutralisants favorisent l’élimination des virus pathogènes du corps et jouent un rôle vital dans la réponse antivirale. La norme de référence pour déterminer l’efficacité des anticorps est la neutralisation virale. La capacité de surveiller rapidement la réponse neutralisante est essentielle à la mise au point de vaccins et de médicaments efficaces. L’essai microPRNT peut être utilisé pour des conditions d’essai à haut débit et à petit volume. Les résultats de cet essai quantifient le nombre d’unités formatrices de plaques (PFU), ce qui permet de mesurer la réduction des PFU par rapport à chaque puits rapportant le niveau de neutralisation.

NEUTRALISATION ET MICRONEUTRALISATION

Le principe de l’essai de neutralisation est le même que le PRNT. La lecture de ce test ne compte pas l’unité formatrice de plaque (PFU) comme critère d’évaluation, mais le niveau de contagiosité est mesuré indirectement par la survie des cellules ou en utilisant des gènes rapporteurs dans le virus tels que la luciférase ou la GFP.

NEUTRALISATION DES PSEUDO-PARTICULES (PNA)

Les pseudo-particules sont des virus déficients en réplication. Ces virus peuvent être modifiés pour héberger la glycoprotéine clé du virus hautement infectieux et d’un rapporteur (luciférase ou protéine fluorescente) qui peut être utilisé pour l’essai au lieu du virus vivant. L’infectiosité du virus peut être quantifiée en fonction de la lecture du rapporteur. Les essais PNA peuvent être effectués avec un confinement biologique inférieur (installations de niveau de biosécurité 2) et constituent une alternative plus sûre à l’utilisation d’agents pathogènes infectieux vivants. Les activités neutralisantes sont mesurées par le niveau de gène rapporteur exprimé (luciférase ou GFP) dans des lecteurs de plaques multipuits qui améliorent la précision et l’objectivité par rapport au comptage manuel des plaques.

INHIBITION DE L’HÉMAGGLUTINATION (HAI)

De nombreux virus comme les virus de la grippe peuvent provoquer une hémagglutination. Le test de dépistage de HAI est utile pour évaluer l’induction d’anticorps fonctionnels à la suite d’une infection ou d’une vaccination. Il est nécessaire de mesurer la réponse immunitaire avant et après la vaccination pour comprendre l’immunité induite par le vaccin.

Meso Scale Discovery (MSD)

Pour une détection hautement sensible de la liaison spécifique, les anticorps SULFO-TAG™ sont un système basé sur l’électrochimiluminescence (ECL) dans des plaques à 96 puits. SULFO-TAG™ s’illumine lors de la stimulation avec un courant électrique, permettant l’amplification des signaux, permettant à l’utilisateur de valider les liaisons en utilisant de faibles concentrations du substrat, permettant ainsi à l’utilisateur de faire des dépistages plus grands.

Luminex

L’approche de Luminex concernant les essais est fondée sur l’utilisation de billes. Cela leur permet de créer des essais multiplexés, avec des billes capables d’identifier différentes cibles. Un simple système de type streptavidine-biotine est ensuite utilisé pour détecter les analytes capturés avec des anticorps biotinylés. L’utilisation de cette technologie agonistique permet à la plateforme Luminex de classer les antigènes avec une interférence mineure des autres antigènes. En contrepartie, la cautérisation de la réponse immunitaire pour chaque antigène est plus précise, permettant ainsi à l’utilisateur de déterminer l’identité des anticorps neutralisants facilitant l’immunité protectrice. Cette alliance de la facilité d’utilisation et d’un dépistage plus précis des antigènes est importante lors du développement de nouveaux vaccins où les plateformes de développement de vaccins combinés et multivalents tiennent une place prépondérante.