Sciences des protéines

Possédant plus de 20 ans d’expérience en biologie moléculaire, en expression des protéines, en purification ainsi qu’en caractérisation structurale et physicochimique des protéines, nos scientifiques feront progresser votre projet pour répondre exactement à vos besoins, allant de la synthèse génétique jusqu’aux protéines purifiées entièrement caractérisées, en utilisant des instruments de pointe. Grâce à leur vaste expertise technique, nos scientifiques peuvent résoudre divers problèmes d’expression et de purification des protéines.

Nous pouvons optimiser vos antigènes pour améliorer l’efficacité et la reproductibilité des immunoessais, les adapter au volume souhaité, au multiplexage ou à d’autres technologies innovantes, réduisant ainsi le coût total. Pour analyser plus en profondeur certains aspects particuliers de la réponse immunitaire, nous offrons également un service de modification des antigènes (ex., troncatures, multimérisations, mutations, etc.).

Vaste expertise en matière de protéines et d’enzymes, en particulier :

Amines transférases
Nitrogénases
Sialidases
Protéases
Protéases à cystéine
Protéines virales ou bactériennes
Contaminants de la cellule hôte
Protéines intracellulaires
Protéines membranaires intégrales
Protéines natives

Protéines de surface
Protéines complexes ou multimériques
Lipoprotéines
Anticorps
Protéines hétéro-oligomères
Protéines formant des particules (ex., VLP)
Pseudo-particules (lentivirus)
Différents types de récepteurs
Canaux ioniques

Biologie moléculaire

Nexelis offre des services d’ADN recombinant sur mesure selon vos besoins particuliers, incluant la synthèse de gènes avec optimisation de codons, la conception de construction, le clonage moléculaire, la mutagenèse, l’isolement de plasmides sans endotoxines et la vérification de séquences d’ADN. D’autres techniques en biologie moléculaire, telles que la PCR quantitative, peuvent être réalisées et adaptées à vos besoins.

Synthèse de gènes

Le gène d’intérêt peut être synthétisé, vérifié et son codon optimisé, pour améliorer l’expression de votre protéine dans les systèmes d’expression procaryote et eucaryote.

Production de plasmide d’ADN

Nexelis peut préparer de l’ADN plasmidique sans endotoxines pour des expériences de culture cellulaire sensibles.

Clonage moléculaire

Nexelis fournit des services de conception de construction, y compris le sous-clonage du gène d’intérêt dans notre vecteur approprié pour le système d’expression.

Mutagenèse

Nexelis fournit des services de mutagenèse dirigée pour l’introduction de mutations ponctuelles et de petites insertions ou délétions dans votre protéine avec une grande précision et efficacité.

PCR quantitative

Nexelis peut effectuer la réaction de polymérisation en chaîne quantitative en temps réel (PCR quantitative) afin d’amplifier et simultanément détecter, caractériser et quantifier les acides nucléiques dans les échantillons biologiques.

Expression des protéines

Nos experts en sciences protéiques utilisent la technologie d’expression des protéines recombinantes pour la production de protéines à l’aide d’ADN recombinant. Pour atteindre le plus haut niveau d’expression qui soit, le système d’expression approprié est sélectionné. Le choix du système d’expression est basé sur le type et les propriétés des protéines, le besoin de modifications post-traductionnelles ainsi que le rendement et le coût des protéines.

Ces systèmes d’expression comprennent les cellules bactériennes, d’insectes, de mammifères et des levures, dans lesquels les paramètres d’expression des protéines sont optimisés.

Expression dans les bactéries

Le système d’expression d’Escherichia coli est l’un des systèmes de choix pour produire des protéines recombinantes puisqu’il est peu coûteux, il offre un niveau d’expression élevé, il est facile à mettre à l’échelle et il a un temps de réponse court. Ce type de système est principalement utilisé pour produire des protéines bactériennes.

Lorsque les systèmes d’expression procaryotes ne parviennent pas à produire des protéines fonctionnelles correctement repliées ou à exprimer les glycoprotéines, un système d’expression à base eucaryote devrait être envisagé.

Expression dans les cellules de mammifères

Notre équipe de scientifiques a mis au point des plateformes d’expression transitoires et stables qui utilisent des cellules HEK293 (rein embryonnaire humain) ou CHO (ovaire de hamster chinois). Les systèmes d’expression des cellules de mammifères sont idéaux pour produire des protéines recombinantes modifiées de façon post-traductionnelle modifiées pour le repliement approprié et l’activité biologique des protéines eucaryotes. Les cellules de mammifères peuvent reconnaître correctement et efficacement les signaux de synthèse, de traitement et de sécrétion des protéines eucaryotes.

Expression dans les cellules d’insectes

Le système de vecteur d’expression de baculovirus (BEVS) est un système eucaryote bien connu pour l’expression de protéines recombinantes dans les cellules d’insectes. Pour exprimer des protéines hétérogènes, un baculovirus recombinant est généré par un processus de recombinaison homologue qui consiste à remplacer un des gènes non essentiels par un gène recombinant codant pour la protéine d’intérêt directement chez Spodoptera frugiperda (Sf9). Les protéines recombinantes peuvent être purifiées à partir de cellules infectées ou de leurs surnageants et présentent généralement un repliement, une formation de liaisons disulfure et une oligomérisation appropriés, ce qui entraîne la production de protéines dont le fonctionnement est similaire à celui de leurs formes naturelles.

Expression dans les levures

Un système d’expression de protéines de levure est un système d’expression eucaryote simple, économique et très efficace. La sécrétion et l’expression intracellulaire des protéines peuvent toutes deux être utilisées. Cela permet une modification post-traductionnelle partielle et le repliement des protéines eucaryotes, tout en maintenant une culture facile et une production à grande échelle. Les deux souches de levure utilisées le plus couramment pour l’expression des protéines sont Saccharomyces cerevisiæ et Pichia pastoris.

Purification des protéines

La purification des protéines consiste en l’isolement d’une protéine d’un mélange complexe. Nexelis maîtrise une variété de techniques chromatographiques et utilise des systèmes de chromatographie de pointe.

L’équipe scientifique de Nexelis possède une vaste expérience dans la mise au point et l’optimisation de stratégies de purification utilisant plusieurs étapes chromatographiques, telles que :

Chromatographie d’affinité: Méthode de chromatographie dans laquelle la protéine d’intérêt est marquée pour faciliter sa purification par affinité pour la matrice à partir d’un mélange de protéines.

Chromatographie hydrophobe: Les protéines sont séparées en fonction de leur hydrophobicité de surface à leur état naturel.

Chromatographie d’exclusion de taille: Méthode de chromatographie dans laquelle les protéines en solution sont séparées en fonction de leur taille.

Chromatographie à échange d’ions: La chromatographie par échange d’ions implique la séparation des molécules en fonction de leur charge nette et de leur affinité pour l’échangeur d’ions. Cette technique permet la séparation de types de molécules similaires par retardement sur une colonne anionique ou cationique par l’augmentation de la force ionique de la phase mobile, ou la modification du pH.

Toutes les protéines purifiées sont livrées avec les éléments suivants :

Concentration en protéines
Pourcentage de pureté
Formulation optimisée pour prévenir la dégradation ou l’agrégation des protéines et assurer un entreposage à long terme
Aliquotage personnalisé selon les spécifications du client
Certificat d’analyse

La purification des protéines natives à partir de sources naturelles peut s’avérer difficile. La quantité de protéine d’intérêt a tendance à être assez faible et les problèmes de contamination sont inévitables. De plus, les protéines peuvent être instables et il n’y a aucun moyen de les amplifier, sauf par enrichissement. Pour faire une purification réussie, il faut comprendre et exploiter les propriétés physiques et chimiques intrinsèques des protéines afin de choisir le schéma de purification approprié de manière logique pour maximiser le rendement et réduire au minimum les étapes.

Caractérisation des protéines

La plateforme de caractérisation des protéines de Nexelis fournit une gamme complète d’essais analytiques de haute qualité pour assurer l’identité, la pureté et les propriétés physicochimiques de la protéine d’intérêt. Nous effectuons plusieurs analyses de routine des protéines tout au long du projet afin d’assurer le contrôle de la qualité et une variabilité minimale d’un lot à l’autre.

Identité et pureté

Nexelis utilise des instruments d’électrophorèse et de chromatographie liquide pour vous fournir des informations sur l’identité, l’homogénéité et la pureté de vos protéines.

Les analyses typiques d’identité et de pureté comprennent :

SDS-PAGE
Western Blot
SEC-HPLC (chromatographie d’exclusion de taille et chromatographie en phase liquide à haute performance)

Propriétés physicochimiques

Nexelis peut vous aider à comprendre la structure et les propriétés physicochimiques de la protéine qui vous intéresse. De plus, nous pouvons déterminer les conditions de conservation optimales qui devraient prévenir l’agrégation et la dégradation, tout en maintenant les fonctionnalités protéiques de votre échantillon en effectuant une variété de techniques de caractérisation analytique orthogonale.

Les évaluations typiques pour une étude de stabilité comprennent les suivantes :

Études de stabilité accélérées
Tests de contrainte (ex., oxydation, température, cisaillement, etc.)
Tests à court et à long terme
Évaluation de l’incidence du gel/dégel des protéines

analyses physicochimiques offertes