PLATEFORMES DE VACCIN INTÉGRÉES
Les défis pour développer des essais et des tests appropriés augmentent lorsque le développement de vaccins est accéléré en réponse aux menaces de maladies infectieuses émergentes. Chez Nexelis, nous développons des essais personnalisés pertinents à l’état pathologique, qui sont adaptés à mesure que la maladie évolue. Cette approche progressive fournit une prédiction précoce de la façon dont le vaccin se traduira par les essais cliniques de phase ultérieure. Un projet de vaccin réussi nécessite non seulement un partenaire expérimenté qui comprend la complexité présentée dans la recherche, mais qui a également la capacité de faire évoluer les opérations.
Notre assistance translationnelle de bout en bout pour vos programmes de vaccins et d’immunothérapie va de la sélection des composés principaux à l’enregistrement post-commercialisation. De plus, nos modèles de travail innovants et adaptés sont idéaux pour évaluer l’efficacité et l’immunogénicité de vos vaccins candidats nécessaires aux approbations réglementaires.
Essais fonctionnels viraux
TESTS DE NEUTRALISATION PAR RÉDUCTION DES PLAGES DE LYSE (PRNT) ET MICROPRNT
Les anticorps neutralisants favorisent l’élimination des virus pathogènes du corps et jouent un rôle vital dans la réponse antivirale. La norme de référence pour déterminer l’efficacité des anticorps est la neutralisation virale. La capacité de surveiller rapidement la réponse neutralisante est essentielle à la mise au point de vaccins et de médicaments efficaces. L’essai microPRNT peut être utilisé pour des conditions d’essai à haut débit et à petit volume. Les résultats de cet essai quantifient le nombre d’unités formatrices de plaques (PFU), ce qui permet de mesurer la réduction des PFU par rapport à chaque puits rapportant le niveau de neutralisation.
NEUTRALISATION ET MICRONEUTRALISATION
Le principe de l’essai de neutralisation est le même que le PRNT. La lecture de ce test ne compte pas l’unité formatrice de plaque (PFU) comme critère d’évaluation, mais le niveau de contagiosité est mesuré indirectement par la survie des cellules ou en utilisant des gènes rapporteurs dans le virus tels que la luciférase ou la GFP.
NEUTRALISATION DES PSEUDO-PARTICULES (PNA)
Les pseudo-particules sont des virus déficients en réplication. Ces virus peuvent être modifiés pour héberger la glycoprotéine clé du virus hautement infectieux et d’un rapporteur (luciférase ou protéine fluorescente) qui peut être utilisé pour l’essai au lieu du virus vivant. L’infectiosité du virus peut être quantifiée en fonction de la lecture du rapporteur. Les essais PNA peuvent être effectués avec un confinement biologique inférieur (installations de niveau de biosécurité 2) et constituent une alternative plus sûre à l’utilisation d’agents pathogènes infectieux vivants. Les activités neutralisantes sont mesurées par le niveau de gène rapporteur exprimé (luciférase ou GFP) dans des lecteurs de plaques multipuits qui améliorent la précision et l’objectivité par rapport au comptage manuel des plaques.
INHIBITION DE L’HÉMAGGLUTINATION (HAI)
De nombreux virus comme les virus de la grippe peuvent provoquer une hémagglutination. Le test de dépistage de HAI est utile pour évaluer l’induction d’anticorps fonctionnels à la suite d’une infection ou d’une vaccination. Il est nécessaire de mesurer la réponse immunitaire avant et après la vaccination pour comprendre l’immunité induite par le vaccin.
Essais fonctionnels bactériens
Nos essais fonctionnels d’anticorps sur les bactéries comprennent des essais complexes tels que :
BACTÉRICIDE SÉRIQUE (SBA)
Les essais SBA sont utilisés pour mesurer le niveau d’anticorps dans le sérum requis pour tuer une bactérie par activation du complément.
OPSONOPHAGOCYTAIRE (OPA)
Les essais OPA quantifient la quantité d’anticorps sériques nécessaire pour opsoniser les bactéries et les soumettre au phénomène de phagocytose en présence de protéines du complément. La proportion de cellules phagocytaires qui engloutissent la bactérie est mesurée à l’aide de systèmes d’analyse d’images automatisés.
Immunochimie – Essais de liaison de ligand
ELISA
Permet des lectures à médiation colorimétrique de 384 ou 96 puits pour détecter et quantifier les peptides, les protéines et les anticorps.
AlphaLISA
Il s’agit d’une solution de rechange sans lavage à l’essai ELISA conçue pour détecter une variété d’échantillons en utilisant un protocole tout-en-un simple. Cet essai nécessite des volumes d’échantillon significativement inférieurs (environ 5 µL d’échantillon par puits) par rapport à un ELISA conventionnel. L’AlphaLISA réduit les étapes de manipulation et la durée totale de l’essai par rapport à celles de l’essai ELISA. Les essais AlphaLISA permettent des économies qui augmentent le débit et s’automatisent facilement sans perte de sensibilité.
Meso Scale Discovery (MSD)
Pour une détection hautement sensible de la liaison spécifique, les anticorps SULFO-TAG™ sont un système basé sur l’électrochimiluminescence (ECL) dans des plaques à 96 puits. SULFO-TAG™ s’illumine lors de la stimulation avec un courant électrique, permettant l’amplification des signaux, permettant à l’utilisateur de valider les liaisons en utilisant de faibles concentrations du substrat, permettant ainsi à l’utilisateur de faire des dépistages plus grands.
Luminex
L’approche de Luminex concernant les essais est fondée sur l’utilisation de billes. Cela leur permet de créer des essais multiplexés, avec des billes capables d’identifier différentes cibles. Un simple système de type streptavidine-biotine est ensuite utilisé pour détecter les analytes capturés avec des anticorps biotinylés. L’utilisation de cette technologie agonistique permet à la plateforme Luminex de classer les antigènes avec une interférence mineure des autres antigènes. En contrepartie, la cautérisation de la réponse immunitaire pour chaque antigène est plus précise, permettant ainsi à l’utilisateur de déterminer l’identité des anticorps neutralisants facilitant l’immunité protectrice. Cette alliance de la facilité d’utilisation et d’un dépistage plus précis des antigènes est importante lors du développement de nouveaux vaccins où les plateformes de développement de vaccins combinés et multivalents tiennent une place prépondérante.
Biologie moléculaire
La plateforme de biologie moléculaire réalise des essais basés sur la PCR en vue de soutenir les études sur les vaccins. Nos essais qPCR et RT-qPCR sont utilisés pour quantifier les particules du vaccin candidat (copies du génome) dans les échantillons en vue de soutenir les études d’excrétion virale.
- qPCR
- RT-qPCR
Essais d’immunité cellulaire
Le développement et l’évaluation des vaccins nécessitent des méthodes de mesure quantitatives et très sensibles, qui puissent évaluer un large éventail de molécules telles que les cytokines, les marqueurs antigéniques et cellulaires. Nos essais cellulaires comprennent les suivants :
ELISpot
L’essai ponctuel immuno-enzymatique (ELISpot) est un essai hautement flexible et polyvalent qui peut être adapté à plusieurs formats de lecture. Les essais ELISpot sont quantitatifs et mesurent les fonctions cellulaires clés des cellules du système immunitaire. Ils sont utiles pour évaluer à la fois les réponses immunitaires adaptatives (humorales) et innées (à médiation cellulaire) à un vaccin.
Réponses humorales (lymphocyte B)
- Détection des cellules sécrétrices d’anticorps (CSA) – IgG/IgA
- Détection des lymphocytes B à mémoire
Réponses immunitaires à médiation cellulaire (lymphocytes T)
- Quantification des cytokines
- Efficacité du vaccin (IFN-γ)
- Quantifier les réponses immunitaires (Th1/Th2)
- Perforine et granzyme B
- Réponses cytotoxiques des lymphocytes T
CYTOMÉTRIE DE FLUX
Pour identifier les médiateurs de l’immunité à court et/ou à long terme, une méthode d’identification, de tri et de caractérisation robuste est nécessaire.
IDENTIFICATION
La coloration intracellulaire des cytokines (CIC) est une technique importante utilisée pour identifier et compter le nombre de lymphocytes T induits par le vaccin. Il s’agit d’une méthode normalisée d’identification des phénotypes des lymphocytes T : des cytokines aux marqueurs en passant par la spécificité de l’antigène.
TRI
Les lymphocytes T et B sont facilement triés à l’aide de cette technologie à l’aide de marqueurs de surface et peuvent être triés davantage pour les changements génomiques et transcriptionnels induits par la vaccination. Les types d’immunité innée peuvent également être triés par marqueurs cellulaires si on le souhaite.
CARACTÉRISATION
L’utilisateur peut choisir des cytokines, des marqueurs et d’autres antigènes. L’essai peut ensuite être conçu pour détecter et quantifier ces molécules particulières dans un seul essai multiplexé.
Exemples de types de cellules et de marqueurs détectés à l’aide de la cytométrie en flux :
- Isolation des cellules mononucléées du sang périphérique (CMSP) ou des lymphocytes T (CD4/CD8)
- Coloration intracellulaire des cytokines (CIC)
- Cytokines (IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13, IL-17, TNF-α)
- Potentiel cytotoxique (CD107a, granzymes, perforine)
- Aide aux lymphocytes B (CD40L)
- Profil de mémoire (CD45RA, CCR7, CD27, CD28)
- Phénotypage (lymphocyte T spécifique à l’antigène) : ASC (CD3)
- Essais de cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (CCDA)
Protéomique
Notre équipe de protéomique travaille sur des projets complexes offrant des solutions de bout en bout, y compris la conception, la construction, la purification et la caractérisation analytique de nouvelles protéines. Des pseudo-particules aux anticorps monoclonaux, le groupe scientifique des protéines Nexelis possède de l’expérience dans la purification d’une vaste gamme de protéines, y compris de grosses molécules complexes produites par une variété de plateformes d’expression. De plus, nous avons accès à une grande variété de méthodes analytiques utilisant des instruments de pointe. La plateforme de protéomique a joué un rôle déterminant dans le développement d’essais de pseudo-particules qui nous permettent de poursuivre les études d’évaluation des vaccins dans des laboratoires de niveau de sécurité biologique 2 (BSL-2) et de gérer la demande d’installations de niveau de sécurité biologique 3 (BSL-3).
La portée de la plateforme de protéomique pour soutenir le développement des vaccins comprend :
- Ingénierie de l’immuno-outils
- Production interne d’antigène
- Expression, purification, caractérisation
- Analyses de stabilité
Modèles in vivo (précliniques)
La sélection des modèles animaux appropriés pour évaluer l’efficacité des candidats au vaccin est essentielle à la réussite de votre programme de recherche préclinique. Nos capacités de service préclinique in vivo comprennent des modèles in vivo personnalisés et des modèles d’efficacité BSL-2 pour étudier l’état pathologique pertinent. Nous offrons plusieurs modèles infectieux in vivo qui couvrent une gamme complète d’espèces pour évaluer l’immunogénicité et/ou l’efficacité des candidats.
Notre équipe a de l’expérience dans la préparation de diverses formulations de vaccins. Choisissez parmi de nombreux modèles in vivo existants et personnalisés pour évaluer l’immunogénicité et/ou l’efficacité des candidats en fonction du mode d’action (MdA), de la permissivité des espèces, des immunotools disponibles, de la voie d’administration et d’autres considérations translationnelles.
De plus, notre plateforme de modèle in vivo prend en charge la production de réactifs ou d’anticorps nécessaires à la réalisation d’essais en aval.
Évaluation de la réponse cellulaire
Nexelis offre des méthodes sophistiquées d’évaluation de la réponse cellulaire par cytométrie en flux et ELISpot, y compris la fonctionnalité après restimulation ex vivo et la réponse immunitaire à médiation cellulaire pour l’efficacité du vaccin. Les bilans et les marqueurs peuvent être personnalisés au besoin.
Biologie moléculaire, biomarqueurs et bioanalyse
Nexelis dispose de nombreuses ressources pour la biologie moléculaire et la bioanalyse, ainsi qu’une vaste gamme d’options de biomarqueurs qui sont constamment mises à jour à mesure que les connaissances évoluent.
Pour les études d’excrétion virale et d’épidémiologie, nous offrons la détection virale par RT-qPCR.